7-2. 選択マーカー
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1) マーカーの意義
すべての細胞に常にDNAが等しく導入され、またすべてのベクターDNAに等しく目的DNAが挿入されるわけではないため、DNA導入細胞を検出するための目印となる遺伝子をベクターなどに組込ませておく必要がある 目的により2つに大別される
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ベクターが細胞に入ったことを知るためのマーカー
ベクターにとって必須
大部分のDNA組込みマーカーは、インサートがマーカー遺伝子内部に入ると遺伝子が破壊される、挿入破壊あるいは挿入失活という使われ方をする マーカーは目的や生物種によって多種多様で、例外もあるが、原核生物用、真核生物用と限定して使用される memo: 挿入DNAがマーカーになることもある
組込まれた遺伝子がマーカーとなる場合がある
2) 検出方法によるマーカーの分類
マーカーは検出の方法や原理により次のように分類できる
光や色で目的クローンが識別できる
代謝欠損細胞で欠損している酵素遺伝子を発現させ、細胞を生存させる そのまま、あるいは特定物質の添加により、マーカー遺伝子が氏安房にとって致死的に作用する
3) 汎用性の高いマーカー
特別な修飾や酵素が不要で、行きたい細胞をリアルタイムで観察でき、被験タンパク質と融合させて、被験タンパク質の細胞内位置を知ることもできる 生物種全般で使用できる